曾海文, 许稽松, 苏婉婷, 陈亚峥
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目的 探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,LncRNA）钾离子电压门控通道亚家族Q 成员1 重叠转录本1（potassium voltagegated channel subfamily Q member 1 overlapping transcript 1,KCNQ1OT1）靶向微小核糖核酸-34a（microRNA-34a,miR-34a）/沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）轴对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响。方法 将人小气道上皮细胞分为对照组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组（10 mg/L LPS处理24 h）,RT-qPCR检测细胞LncRNA KCNQ1OT1、miR-34a、SIRT1 mRNA水平;双荧光素酶实验及RNA pull-down实验检测LncRNA KCNQ1OT1、SIRT1分别与miR-34a的靶向关系;将实验小鼠随机分为对照组、模型组、NC组、KCNQ1OT1组、KCNQ1OT1+NC组、KCNQ1OT1+miR-34a组,除对照组外,其余小鼠均通过腹腔注射10 mg/kg LPS构建脓毒症急性肺损伤小鼠模型;RT-qPCR检测肺组织LncRNA KCNQ1OT1、miR-34a、SIRT1 mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、IL-1β mRNA、caspase-3 mRNA、Bax mRNA水平;酶联免疫吸附测定检测肺组织匀浆炎性因子水平;检测各组小鼠肺湿重/干重（wet weight/dry weight,W/D）值;HE染色观察肺组织病理学变化;TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡;蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白水平。结果 细胞实验发现,相较对照组,LPS组LncRNA KCNQ1OT1、SIRT1 mRNA水平降低,miR-34a水平升高（P<0.05）;双荧光素酶实验及RNA pull-down实验发现LncRNA KCNQ1OT1、SIRT1与miR-34a之间均存在靶向关系。动物实验发现,相较对照组,模型组小鼠的肺泡发生塌陷,数量减少,肺泡及肺间质充血水肿,可见大量炎性细胞浸润并伴有点状或片状出血灶,LncRNA KCNQ1OT1、SIRT1 mRNA水平降低,miR-34a水平、TNF-α mRNA与蛋白水平、IL-6 mRNA与蛋白水平、IL-1β mRNA与蛋白水平、caspase-3 mRNA与蛋白水平、Bax mRNA与蛋白水平、W/D值、细胞凋亡率及活化的caspase-3蛋白水平升高（P<0.05）;相较NC组,KCNQ1OT1组肺组织病理损伤明显改善,LncRNA KCNQ1OT1、SIRT1 mRNA水平升高,miR-34a水平、TNF-α mRNA与蛋白水平、IL-6 mRNA与蛋白水平、IL-1β mRNA与蛋白水平、caspase-3 mRNA与蛋白水平、Bax mRNA与蛋白水平、W/D值、细胞凋亡率及活化的caspase-3蛋白水平降低（P<0.05）;相较KCNQ1OT1+NC组,KCNQ1OT1+miR-34a组肺组织病理损伤加重,SIRT1 mRNA水平降低,miR-34a水平、TNF-α mRNA与蛋白水平、IL-6 mRNA与蛋白水平、IL-1β mRNA与蛋白水平、caspase-3 mRNA与蛋白水平、Bax mRNA与蛋白水平、W/D比值、细胞凋亡率及活化的caspase-3蛋白水平升高（P<0.05）。结论 LncRNA KCNQ1OT1可改善小鼠脓毒症急性肺损伤,与靶向抑制miR-34a/SIRT1轴有关。
